• 仪器分析课堂笔记:如何阅读色谱流出曲线?


    更新:10 APR 2016

    参考教材:《仪器分析》南京大学版

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    典型色谱流出曲线

    一、基本参数

    1.基线

    图中(OO’)线,应为水平直线。

    在本文中横坐标视为时间,纵坐标视为检测浓度信号。

    2.死时间(t_o)

    不被固定相吸附或溶解的组分,多为初始气体如空气。

    3.保留时间(t_R)

    组分从进样开始到色谱峰顶所对应的时间。

    4.调整保留时间(t’_R)

    待测组分(“滞留组分”)比非滞留组分停留多出的时间。(t’_R=t_R-t_o)

    5.峰高(h)

    色谱峰顶到基线的垂直距离。

    6.标准偏差(sigma)

    正态分布曲线两侧拐点之间距离的一半,即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。反映谱带展宽的程度。

    7.半峰宽(W_{1/2})

    色谱峰高一半处的宽度。(W_{1/2}=2sigmasqrt{2ln 2})

    8.峰底宽(W_b)

    从色谱流出曲线两侧拐点所作的切线与基线交点之间的距离。(W_b=4sigma)

    9.描述曲线

    (c=dfrac{m}{Fsigmasqrt{2pi}}expleft[-dfrac{1}{2}left(dfrac{t-t_R}{sigma} ight)^2 ight])

    m:组分质量

    F:流动相的体积速度

    二、塔板理论

    1.保留体积/保留值

    组分的保留体积即组分保留时间内流过的流动相体积。定义式(V_R=t_R imes F_c)

    注意流速增大保留时间随即减小,保留体积不变。

    相应有死体积(V_m)和调整保留时间(V’_R)。也与流速无关。

    保留值可以由保留时间、保留体积或相对保留值(见后)表示。

    2.线速度

    组分的线速度(r=dfrac{L}{t_R})

    流动相的线速度(u=dfrac{L}{t_o})

    (L)为柱长。

    3.基本保留方程

    保留时间取决于柱长、流动相速度、分配系数与两相体积。

    (t_R=t_o(1+k’)=dfrac{L}{u}left(1+Kdfrac{V_s}{V_m} ight))

    由于(t_R)等可以事先确定或由图得到,由此也可以确定分配比(k’)。

    (k’=dfrac{t_R-t_o}{t_o}=dfrac{t’_R}{t_o})

    两组分的相对保留值(alpha_{2,1}=dfrac{k’_{(2)}}{k’_{(1)}}) 用来讨论固定相对组分的分离能力。主要取决于固定相性质,其次是色谱柱温度。值越大选择性越高,等于1时两组分重叠。

    4.理论塔板数

    用来评价一根柱子的柱效。

    由半峰宽:(n=5.54left(dfrac{t_R}{W_{1/2}} ight)^2)

    由峰底宽:(n=16left(dfrac{t_R}{W_b} ight)^2)

    塔板高度:(H=dfrac{L}{n}) 其中色谱柱长为(L)。

    三、分辨率/分离度

    1.分离度定义

    (R_s=dfrac{t_{R(2)}-t_{R(1)}}{dfrac{1}{2}left(W_{b(1)}+W_{b(2)} ight)})

    即 (分辨率=dfrac{保留时间差}{峰底宽均值})

    达到“基线分离”指(R_s=1.5)。

    2.基本分离方程

    分离度由理论塔板数、相对保留值、分配比决定。假定两组分色谱峰底宽相等,有

    (R_s=dfrac{sqrt{n_2}}{4}cdotdfrac{alpha-1}{alpha}cdotdfrac{k’_2}{1+k’_2})

    其中(n_2)为组分2对应的理论塔板数,(alpha)为两组分的相对保留值,(k’_2)为组分2对应的分配比。

    利用分离方程可以从要求的分离度(如达到基线分离)得到需要的塔板数。

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