• 文件格式——fastq格式


    fastQ格式

    FASTQ是一种存储了生物序列(通常是核酸序列)以及相应的质量评价的文本格式.

    他们都是以ASCII编码的。现在几乎是高通量测序的标准格式。NCBI Short Read Archive也是这格式,多了一些描述性词汇而已。

    基本格式

    包含四行,第一行'@'开始,后面跟着序列的描述信息,这点跟FASTA格式是一样的

    第二行是序列

    第三行由'+'开始,后面也可以跟着序列的描述信息

    第四行是第二行序列的质量评价(quality values,注:应该是测序的质量评价),字符数跟第二行的序列是相等且对应的。

    举例子

    第一行以@开头,后面是readsID以及其他信息,例如上例中 HWUSI-EAS100R代表Illmina设备名称,6代表flowcell中的第六个lane73代表第六个lane中的第73tile941:1973代表该read在该tile中的xy坐标信息;#0,若为多样本的混合作为输入样本,则该标志代表样本的编号,用来区分个样本中的reads/1代表paired end中的前一个read

    第二行为read的序列

    第三行以+”开头,跟随者该read的名称(一般于@后面的内容相同),但有时可以省略,但“+”一定不能省

    第四行代表reads的质量。这一行可以详细说一下!

    Q值得计算

    Illumina测序仪是按照荧光信号来判断所测序的碱基是哪一种的,例如红黄蓝绿分别对应ATCG,那么一旦出现一个紫色的信号该怎么判断呢,因此对每个结果都有一个概率的问题。起初sanger中心用Phred quality score来衡量该read中每个碱基的质量,既-10lgP ,其中P代表该碱基被测序错误的概率,如果该碱基测序出错的概率为0.001,则Q应该为30,那么30+33=63,那么63对应的ASCii码为,则在第四行中该碱基对应的质量代表值即为ASCii参考如图2

    P=0.001时,Q=30;P=0.01时,Q=20;P=0.1时,Q=10。

    2

    格式转换

    FASTQ格式Fasta格式GenBank等格式可以相互转换。格式转换器如下:

    Biopython version 1.51 onwards (interconverts Sanger, Solexa and Illumina 1.3+)

    EMBOSS version 6.1.0 patch 1 onwards (interconverts Sanger, Solexa and Illumina 1.3+)

    BioPerl version 1.6.1 onwards (interconverts Sanger, Solexa and Illumina 1.3+)

    BioRuby version 1.4.0 onwards (interconverts Sanger, Solexa and Illumina 1.3+)

    BioJava version 1.7.1 to 1.8.x (interconverts Sanger, Solexa and Illumina 1.3+)

    MAQ can convert from Solexa to Sanger (use this patch to support Illumina 1.3+ files).

    fastx_toolkit The included fastq_quality_converter program can convert Illumina to Sanger

    Illumina中应用

       Illmina有多种测序仪,从早期的GAHiseq2000Hiseq2500以及Hiseq X, Hiseq2000一个flowcell中包含8lane,每个lane可以测一个文库或多样本的混合文库,多样本混合文库如果需要后期区分则每个文库需要一个独特的标签,即Index。其中一个lane包含3(3Swath),每一列又包含8tile,每一个tile又会种下不同的cluster,如图1所示为Hiseq2500FlowCell的一个表面。3

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