• 单细胞测序|单细胞基因组|单细胞转录组|Gene editing|


    单细胞测序

    单细胞基因组学

    测量理由是单细胞的时间空间特异性。

    Gene expression&co-expression

     

    比较正常cell与疾病cell,正常organ与疾病organ,看出偏差。

    分离单细胞,破碎细胞,RNA逆转录,测量cDNA。

    Eg:BAC扩增,可以实现bias很小的的genome,genome质量高。

    Eg:对sperm cell进行single cell,

    Eg:oocyte与sperm结合后,可以对过程中丢弃的部分进行single cell。

    如果父源或母源中任何一方有过重组,则最后结合的细胞会发生突变。

    Eg:在临床上解决家族遗传病。

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    单细胞转录组

    R1 +10X barcode+UMI+poly(dT)VN

    先抓取,对RNA进行扩增,加接头,放入测序仪中测序。

    10X genomics 技术流程,真正的单细胞,超高的细胞通量,细胞捕获效率高,性价比高。

    Ps:现在最新的还有空间转录组

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    应用实例:

    Eg:研究衰老

    Eg:生殖健康

    Eg:描绘重编程

    Eg:检测胚胎发育,到14

    Eg:细胞水平成像,可以基于空间或者时间

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    Gene editing:

    zine finger protein

    Talen用一个单元识别一个碱基。

    Crispr

    CRSIPR在2012年实现Mamalian cells。

     

    来源于免疫系统,可以记录何种序列曾经入侵,然后针对该入侵序列制作剪切物质,通过该剪切物质能够对目标序列进行剪切。

    参考:http://blog.sciencenet.cn/blog-3160644-983657.html

    Genome editing类型:

    CRISPR-CAS9

    单个碱基Base editing

    一小段碱基Prime editing

    挑战:

    Delivery是否能传递到目标位置。

    因为剪切物是外源物质,考虑Immune system是否会影响该方法

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    应用:

    Eg:editing之后看表型变化,实践之后发现有很多indel,除去人为改变的位点之后,该位点周围的位点也会发生改变,比如RNA的改变。

    Eg:流行病应用中发现Cas13的剪切不受控制,现在可以做放大信号的作用。

    检测疾病标志物,然后放大。

    Eg:发现重复序列,将其从中间切开然后part1与part2互补拼接。

    Eg:将一大段DNA整合进入目标位置。

    Eg:记录小鼠development的过程。

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  • 原文地址:https://www.cnblogs.com/yuanjingnan/p/11978556.html
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