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GEO数据库全称GENE EXPRESSION OMNIBUS,成立于2000年,是由美国国立生物技术信息中心NCBI创建并维护的基因表达数据库,主要收录高通量基因表达数据。除SRA数据库之外,GEO数据库也是目前文章投递数据上传的数据库之一。
数据上传需要提交各种类型的数据、表格和资料,过程比较繁琐。以下是一份详细的数据上传指南,每一步都有详细的说明,一看就会,再也不用担心数据上传。下面主要介绍RNA-seq和ChIP-seq的上传流程。
注册账号
首先需要注册一个NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/submitter/),GEO账号,如果已经有账号,可以直接点击登录。
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/info/submission.html
数据准备
选择需要上传的高通量数据
需要上传的数据有三种
1. Metadata spreadsheet
该文件是关于整个研究中样本和实验的相关信息。
- 1.1 SERIES
主要包含文章的标题、概述、实验整体设计、共同作者、补充材料和SAR号(SRA号为选填,如果已经上传了SRA,则填上,否则空着即可)。此项需要填写的稍微详细一点,不然后面GEO可能发邮件要求补充abstract。
- 1.2 SAMPLE
样品的详细信息,包括样品名称、来源、器官、年龄、表达值数据和原始数据等,如果是ChIP-seq,还需要提供相关的抗体信息。
1.3 PROTOCOLS
样品的实验和提取建库详细信息。
1.4 DATA PROCESSING PIPELINE
数据处理步骤,参考基因组详细信息。
1.5 PROCESSED DATA FILES
RNA-seq或者ChIP-seq等实验,通常需要提供一些额外的数据文件,比如基因表达量,基因信号文件和MD5(用来核实真伪)等。
1.6 RAW FILES
原始数据详细信息
1.7 PAIRED-END EXPERIMENTS
双端测序序列详细信息,此项可不填。
2. Processed data files
经过处理的数据是GEO提交的必要部分,GEO会审核客户上传的处理过的数据,以此来检验相关文章结论的真实可靠性。RNA-seq可以上传基因表达量文件,ChIP-seq可以上传WIG, bigWig, bedGraph等,不过由于是中间文件,该部分内容没有完全固定的格式。
3 Raw data files
原始数据一般采用FASTQ格式,另外SRA数据库接受的其他格式也是可以的(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra/docs/submitformats/)。
准备好所有数据之后选择Uploading your submission,Transter Files。
数据上传
数据上传,小编推荐FileZilla(https://filezilla-project.org/可以先在此处下载)。打开FileZilla,主机(H) 框填写上图中host对应的内容ftp-private.ncbi.nlm.nih.gov,用户名(U)填写geoftp,密码填写rebUzyi1(此项可能不定期更新),端口号可不填,全部填好后,点击快速连接按钮。
- 3.1 连接成功后,在远程站点下的文件名展示中创建自己的文件,例如ABC,将本地站点中需要上传的数据拖入右下角的方框内。
- 3.2 快速连接后,也可能显示“错误: 读取目录列表失败”,此时可忽略该项,直接在远程站点输入数据存放地址,然后回车,该地址会在选择Uploading your submissionTransfer Files后自动弹出。然后同样将本地站点中需要上传的数据拖入FileZilla右下角的方框内即可。
注意:使用FileZilla上传要注意进行相关设置,不然会一直中断,导致上传失败。选择编辑中的设置,连接,在重连设置中进行以下设置。
通知GEO数据上传完成
数据上传完成后,需要通过以下方式通知GEO:
也可以给GEO(geo@ncbi.nlm.nih.gov)发送邮件,邮件内容可以参考下方:
一般GEO第二天就会回复邮件,5个工作日以内会告知具体的GEO号。
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